Recherche de marqueurs moléculaires chez le haricot (phaseolus vulgaris l. ) En relation avec des caractères phénotypiques : application à la caractérisation variétale
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Nous avons utilisé la technique RAPD pour rechercher des marqueurs liés à des gènes gouvernant des caractères phénotypiques d'intérêt chez le haricot (phaseolus vulgaris l. ). Des croisements entre l'accession pi 165426, d'origine mexicaine, et la variété cultivée fin de Bagnols, nous ont permis d'obtenir une descendance de plantes f2. En nous basant sur l'observation de leurs phénotypes, nous avons réalisé une analyse de ségrégation par lots (Michelmore et coll. , 1991) pour identifier des marqueurs RAPD liés au gène contrôlant le mode de croissance du haricot. Un fragment d’ADN, appelé greo8-1400, lie à l'allèle indéterminé de ce gène a ainsi été mis en évidence. Nous avons exploré les capacités de la technique RAPD à générer du polymorphisme en l'associant à d'autres techniques. Nous avons montré que la distinction entre polymorphismes qualitatif et quantitatif ne peut s'effectuer qu'en associant l'analyse des profils d'amplification à des étapes de clonage de fragments amplifiés et d'hybridation moléculaire. Nos résultats ont démontré que différentes séquences d’ADN non séparées après électrophorèse sur gel peuvent être amplifiées simultanément par une amorce. L'existence d'homologies entre fragments d'un même profil a été démontrée. Nous avons amplifié les ADN de neuf variétés de haricot avec treize amorces à des fins de caractérisation variétale. 156 marqueurs nous ont permis d'établir un phénogramme à partir des distances génétiques séparant ces neuf variétés. L'utilisation de produits d'amplification comme sonde RFLP nous a conduit à cloner et séquencer le produit amplifie opg9-520. Ce fragment génère des empreintes génétiques et peut être utilisé pour caractériser les variétés de haricot.