Abstract FR:

La production de fos par voie enzymatique a partir d'inuline de chicoree implique l'utilisation d'endoinulinase. Une methode de semi-purification de cette enzyme a partir du melange commercial du novozym 230 (origine aspergillus ficuum) a donc ete mise au point et automatisee a l'echelle du pilote industriel. L'endoinulinase a ete immobilisee via l'utilisation d'un reacteur enzymatique a membrane d'ultrafiltration. Les molecules de dp superieur a 7 residuelles peuvent etre eliminees par une nanofiltration. Le taux de molecules de dp 1 et dp 2 est reduit par une chromatographie sur resine calcium. Les hydrolysats d'inuline obtenus a l'aide de la preparation endoinulinasique semi-purifiee doivent subir un traitement post-hydrolyse qui alourdit de facon consequente le cout de fabrication des sirops de fos. La production d'endoinulinase pure par voie biotechnologique permet de resoudre ce probleme. L'endoinulinase d'a. Ficuum est purifiee par electrophorese sur gel de polyacrylamide en conditions natives. Trois formes enzymatiques ont ete mises en evidence, elles sont constituees d'une proteine identique presentant des taux de glycosylation differents. Ces trois formes d'endoinulinase presentent un rapport i/s infini et une activite specifique de l'ordre de 300 u/mg. L'enzyme pure permet de produire des hydrolysats d'inuline contenant 90% de fos sans autre traitement. Des sequences peptidiques de l'endoinulinase purifiee ont ete determinees. Elles ont permis de synthetiser des sondes oligonucleotidiques degenerees. A l'aide de ces amorces, un fragment d'adn homologue a ete amplifie par pcr sur de l'adn genomique d'a. Ficuum. Cette sonde de 786 pb a ete utilisee pour cribler une banque genomique afin d'isoler le gene codant pour l'endoinulinase chez a. Ficuum, dans le but de construire une souche heterologue secretant de l'endoinulinase pure.