Abstract FR:

La ferredoxine i (fedi) a centre 2fe-2s distribue les electrons issus du photosysteme i (psi) a diverses voies du metabolisme. Nous avons clone le gene fedi correspondant de la cyanobacterie synechocystis pcc6803 (synechocystis) qui sert de modele pour l'etude de la photosynthese. Le gene fedi est essentiel ; il ne peut pas etre delete de la totalite des dix copies de chromosome, meme en presence de glucose qui compense la perte d'activite photosynthetique, ce qui indique que la fedi recoit alors les electrons d'un autre donneur que le psi. Pour aborder l'etude in vivo de la fedi, nous avons developpe une strategie genetique originale qui permet de manipuler les genes essentiels de synechocystis. Le gene fedi a ete clone dans notre vecteur d'expression thermoregulee qui, des lors, autorise (39c) ou bloque (30c), la synthese de fedi. A 39c, nous avons obtenu une souche dfed::km#r/pccv1, dans laquelle le gene fedi est remplace par un gene codant pour la resistance a la kanamycine (km), sur les dix copies de chromosome. Par cette strategie, nous avons montre que le gene fedi de synechococcus pcc7942 peut complementer la deletion du gene fedi de synechocystis. Par contre, le gene peti (que nous avons clone), qui code pour la flavodoxine (un autre accepteur des electrons du psi), n'en est pas capable. Quatre alleles du gene fedi ont ete construits par mutagenese dirigee, clones dans notre vecteur d'expression constitutive, et introduits independemment dans la souche dfed::km#r/pccv1. Dans chaque cas, le plasmide pccv1 (sm#r) qui exprime le gene fedi sauvage a 39c a ete chasse a 30c, en presence de cm et en absence de sm, par les plasmides pmpfedm (cm#r), qui produisent les ferredoxines mutantes meme a 30c. Alors que la mutation fedc88a n'a pas de consequences, les ferredoxines fede93a et fedc85vral montrent une reduction d'affinite pour le psi. Fedc85v montre que le pont disulfure hypothetique de fedi ne semble pas intervenir dans les proprietes de la ferredoxine i.