Etude d'un adnc d'arabidopsis thaliana capable de complementer le mutant sec14 de saccharomyces cerevisiae
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Paris 6Disciplines:
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Le gene sec14 de saccharomyces cerevisiae code pour une proteine de transfert de phosphatidylinositol et phosphatidylcholine (sec14p s c) qui intervient dans le trafic membranaire a partir de l'appareil de golgi. Cette proteine, localisee a la peripherie des membranes golgiennes, est indispensable au developpement de cet organisme. Des etudes genetiques et biochimiques ont demontre que sec14p s c permet de reguler la biosynthese de la phosphatidylcholine via la voie des nucleotides. Le complexe forme par la proteine sec14p s c et la phosphatidylcholine inhibe l'enzyme cle de la voie des nucleotides, la choline phosphate:cytidylyltransferase, mettant ainsi en relation la synthese de la phosphatidylcholine et la concentration de ce phospholipide au sein des membranes golgiennes. Les proteines de transfert de lipides isolees jusqu'a present chez les vegetaux transferent indifferemment les phospholipides. Leur localisation extracytoplasmique exclut toute fonction lors de la biogenese des membranes. La complementation fonctionnelle du mutant sec14-3 t s de levure, dont la proteine sec14p s c est thermosensible, a permis d'isoler un adnc d'arabidopsis thaliana capable de restaurer la croissance de ce mutant place a 37\c, temperature non permissive. La capacite de cette proteine a transferer le phosphatidylinositol a ete demontree in vitro. La mise en evidence de l'activite de transfert de phosphatidylcholine est plus delicate. L'expression de cet adnc au sein de la souche sauvage de levure a permis de montrer que cette proteine permet, comme sec14p s c, de reduire la biosynthese de la phosphatidylcholine. L'etude de la sequence proteique deduite de l'adnc d'a. Thaliana montre que celle-ci presente de fortes similarites avec la proteine sec14p s c de s. Cerevisiae. Une analyse de type southern revele qu'un seul gene (atsec14) codant pour cette proteine est present au sein du genome d'a. Thaliana. L'analyse de l'expression spatiale du gene atsec14 a permis de montrer que ce gene s'exprime dans tous les tissus dans lesquels sa presence a ete recherchee.