Abstract FR:

La segpx est une proteine cytosolique eucaryote constituee par 4 sous-unites identiques. Chaque sous-unite contient au site actif un atome de selenium sous forme d'un residu selenocysteine (secys). Cet acide amine selenie est incorpore dans la chaine polypeptidique selon un mecanisme co-traductionnel. Il est specifie par un codon uga habituellement reconnu comme un codon d'arret de la synthese proteique. Notre objectif initial etait de produire le segpx dans un hote heterologue afin d'en etudier le mecanisme d'action et le role pharmacologique. La bacterie e. Coli a la capacite de synthetiser une selenoproteine, la formate dehydrogenase (fdh). Dans un premier temps, nous avons construit des plasmides pour exprimer la segpx dans e. Coli. Ces constructions nous ont permis d'obtenir la synthese, a un haut niveau, de mutants de la glutathion peroxydase. Dans ces mutants, le codon secys (uga) a ete remplace soit par un codon cysteine (ugc ou ugt) soit par un codon serine (tca). Cependant, la synthese de la molecule seleniee a partir de la sequence contenant le codon uga n'a pu etre detectee. Ces resultats nous ont conduit a conclure que le mecanisme d'incorporation de la selenocysteine n'etait pas conserve entre procaryotes et eucaryotes. La deuxieme partie de ce travail a ete consacree a la purification et la caracterisation des mutants de la segpx. Dans les tests mettant en evidence l'activite glutathion peroxydase, seul le mutant cysteine est capable de reduire les hydroperoxydes en utilisant le glutathion comme substrat reducteur. L'etude de l'activite catalytique du mutant cysteine nous a permis de mieux comprendre le role essentiel du selenium au sein du site actif de l'enzyme