Abstract FR:

L'hematopoiese est controle par une balance de regulateurs positifs et negatifs. Nous nous sommes plus particulierement interesse a un regulateur negatif, le facteur plaquettaire 4. Cette proteine de 7,8 kda est un membre de la famille des chemokines cxc dont le mecanisme d'action reste encore a elucider. Le but de cette etude est d'identifier les domaines fonctionnels du pf4 et de determiner leur implication dans la regulation negative de cette chemokine. Afin d'evaluer l'action inhibitrice du pf4 et de ses peptides sur la lignee megacaryocytaire, nous avons mis au point un systeme automatique d'analyse d'images, base sur la coloration a l'acethylcholinesterase. Cet appareil nous permet d'etudier la phase de proliferation en mesurant le nombre le nombre de megacaryocytes (mk) et de leur colonies (cfu-mk), ainsi que la phase de maturation en calculant la surface de chaque mk. Afin de mieux comprendre le mode d'action du pf4, nous avons synthetise differents peptides apparentes au pf4 et mesure leur effet sur la proliferation des progeniteurs hematopoietiques. Nous avons etudier le role de la region c-terminale du pf4 sur une lignee megacaryoblastique meg-01, puis le domaine centrale du pf4 sur des cellules de moelle osseuse de souris. La molecule native et les peptides p47-58 et p47-70 de la region c-terminale sont actifs a partir de 650 nm alors que les peptides p47-55 et p58-70 n'ont aucune action inhibitrice. En revanche, les peptides p17-58 et p34-58 inhibent la formation des cfu-mk, cfu-gm et bfu-e, a partir de 22 nm, contrairement au pf4 qui possede une specificite vis a vis de la lignee megacaryocytaire. Tandis que l'activite des peptides de la region c-terminale est neutralisee par l'heparine, celle des peptides de la region centrale n'est pas modulee par cette molecule. En effet, la sequence responsable de la haute affinite pour l'heparine est omise dans le peptide p34-58, empechant ce peptide de s'associer a l'heparine. Le motif dlq, specifique du pf4 et present dans le peptide p34-58 est indispensable a l'activite inhibitrice. Jusqu'a present, les propriete inhibitrice du pf4 etaient liees a son domaine liant l'heparine qui lui permettait d'interagir avec la surface cellulaire. L'ensemble de nos resultats mettent en evidence un nouveau domaine fonctionnel dans la partie centrale du pf4 (34-58) dependant du motif dlq.