Etude de la regulation des genes chez saccharomyces cerevisiae. Application a l'expression de proteines heterologues chez la levure
Institution:
Paris 11Disciplines:
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La levure est un excellent modele eucaryote pour l'etude du controle de la transcription des genes, resultant d'interactions entre sequences nucleotidiques specifiques et facteurs proteiques. L'analyse du promoteur du gene cyp3 codant pour l'iso2 cytochrome c chez s. Cerevisiae, revele une sequence soumise a l'action d'un represseur, et une autre qui est la cible d'un activateur. L'etude d'un mutant qui surexprime cyp3 montre que le facteur proteique cyp1 est responsable de cette activation. Le gene cyp3 est egalement soumis a la repression catabolique generale. Le gene de la beta-glucosidase, enzyme qui hydrolyse le cellobiose, est activement transcrit chez k. Fragilis. Ce gene a ete clone et sequence chez s. Cerevisiae. La deletion de la region 5 jusqu'a la position -287/atg entraine une surexpression d'un facteur 50. La beta-glucosidase represente alors 15% des proteines totales, suggerant la presence d'un promoteur fort reconnu par s. Cerevisiae. Ce phenomene est du a une augmentation de la transcription, les messagers etant identiques chez s. Cerevisiae transformee par kf2 (gene de la beta-glucosidase surexprime), a ceux presents chez l'hote d'origine. Des deletions processives, puis internes, du promoteur realisees en presence de glucose ou de glycerol, revelent deux types de regions: une zone comprise entre -388 et -287 pb reconnue par un element negatif, et une sequence comprise entre -584 et -287 pb reconnue par un facteur lie a la repression catabolique. Un modele de regulation du gene de la beta-glucosidase de k. Fragilis est propose chez s. Cerevisiae. Le promoteur fort du gene de la beta-glucosidase clone sur un vecteur de levure, permet l'expression du gene de l'interleukine2 humaine chez s. Cerevisiae. Bien que les transcrits heterologues soient abondants, la proteine recombinante est faiblement produite. La presence d'une sequence signal en 5, isolee du gene de