Abstract FR:

Les enterobacteries, famille de contaminants tres repandus, sont recherches dans les aliments et dans l'eau comme indicateurs de contamination et/ou comme pathogenes. Les industriels souhaitent pouvoir les detecter le plus rapidement et specifiquement possible, pour realiser des controles en ligne de leur production. Nous proposons d'utiliser deux techniques rapides : la cytometrie en flux et la cytometrie a balayage, en les associant a l'immunochimie, pour rendre la detection specifique. Les anticorps sont utilises de deux facons differentes pour extraire specifiquement les enterobacteries du produit alimentaire avant l'analyse en cytometrie en flux ou pour marquer specifiquement les enterobacteries avant leur detection en cytometrie a balayage au cours de l'analyse. La detection des enterobacteries est realisee dans les aliments en combinant la separation immuno-magnetique (ims) et la detection par cytometrie en flux. La cytometrie en flux est performante et rapide en milieu synthetique, mais son application en milieu alimentaire peut etre genee par les particules des produits. La concentration en bacteries doit dans certains produits etre superieure a 10#5/ml pour etre detectee, ce qui limite l'interet de la technique. Pour ameliorer ce seuil, nous proposons d'utiliser l'ims, qui permet de separer et de laver specifiquement les enterobacteries des autres bacteries et des particules alimentaires. L'ims permet une recuperation de 30 a 70% des enterobacteries presentes dans un echantillon. Le seuil de detection obtenu en combinant les deux techniques est de 100 enterobacteries/g en 3 h, dans un aliment naturellement contamine. Pour des contaminations plus faibles en enterobacteries, nous developpons une methode de detection basee sur le marquage immunologique des enterobacteries immobilisees sur un filtre, avant leur analyse par cytometrie a balayage. Seules les bacteries capables de s'allonger sur un melange d'antibiotiques et de nutriments, donc viables, avant le marquage peuvent etre detectees au cours de l'analyse. Nous developpons un melange d'antibiotiques (acide nalidixique + ciprofloxacine) qui permet d'obtenir les meilleurs resultats sur les enterobacteries. Cette methode permet la detection de moins de 10 enterobacteries parmi 4000 autres bacteries dans de l'eau en 7h30.