Abstract FR:

Dans une premiere tentative d'isolement du gene de structure de la sous-unite de 95 kilodaltons de tfiiic, une sonde immunologique a ete utilisee et a permis le clonage du gene bdf1. Ce gene est unique et localise sur le chromosome 4. Il n'est pas essentiel a la viabilite cellulaire, mais est important pour la croissance normale des cellules. Le gene bdf1 code pour une proteine appartenant a la famille des proteines a bromodomaine. Une sonde nucleotidique derivee d'informations de microsequence peptidique a ete utilisee pour cribler une banque d'adn genomique et a permis l'isolement du gene tfc1. L'unique copie de ce gene est localisee sur le chromosome 2. Le gene tfc1 est essentiel a la viabilite cellulaire. Le produit de ce gene est effectivement la sous-unite de 95 kilodaltons de tfiiic. La region acide de 100 acides amines de la proteine n'est pas essentielle a l'activite du facteur. Par mutagenese dirigee, des copies modifiees du gene tfc1 ont ete construites et ont servi a etudier la structure de tfiiic, la stoechiometrie des differentes sous-unites, ainsi que leur phosphorylation in vivo. Une seule sous-unite de 95 kilodaltons est presente dans le facteur. Cette sous-unite a pu etre visualisee par microscopie electronique dans le domaine de liaison au bloc a des genes d'arn de transfert. Des experiences d'immunoprecipitation ont permis de montrer que les 4 sous-unites de 138, 131, 95 et 91 kilodaltons sont fortement associees et que les trois premieres sont phosphorylees in vivo, de maniere non concomitante a la synthese des proteines et reversible