Abstract FR:

Le mutant ste 1 a ete isole par le criblage d'une population de 22500 plantes issues d'une mutagenese-ems base sur l'analyse des sterols de feuille par chromatographie en phase gazeuse. Le profil biochimique de ste 1 est caracterise par l'accumulation de trois <#7-sterols liee a la diminution des trois <#5-sterols correspondant qui sont les produits de fin de chaine biosynthetique contenus dans les feuilles sauvages. Les structures de ces <#7-sterols ont ete determinees par chromatographie en phase gazeuse couplee a la spectrometrie de masse et par la resolution de spectre obtenu par resonance magnetique nucleaire du proton d'un sterol, apres purification par hplc. Cette accumulation de <#7-sterols suggere que le mutant est deficient au niveau de l'etape de c5-desaturation. L'analyse genetique montre que l'accumulation de <#7-sterols est due a une mutation unique, nucleaire et recessive. Un gene de levure, erg 3, codant pour la <#7-sterols-c5-desaturase a ete introduit dans les racines de plantes sauvages et ste 1 par l'utilisation du plasmide ti et d'agrobacterium tumefaciens. L'analyse biochimique de tissus transgeniques, obtenus de racines ste 1, montrent une augmentation des <#5-sterols concomitante a une diminution des <#7-sterols en comparaison du profil sterolique du mutant ste 1. L'expression du gene erg 3 permet la complementation du mutant ste 1. Ce dernier resultat suggere fortement le fait que l'accumulation de <#7-sterols est liee a la deficience de la <#7-sterols-c5-desaturase dans la voie de biosynthese des <#5-sterols. La complementation fonctionnelle du mutant erg 3 de levure par une banque d'adnc d'arabidopsis thaliana a abouti au clonage du gene codant pour la <#7-sterol-c5-desaturase sauvage. Cette sequence est a la base de la caracterisation moleculaire du mutant ste 1