Abstract FR:

Les determinants d'interaction des arnt#m#e#t ont ete identifies grace a une strategie basee sur l'obtention d'arnt chimeriques de sequence desiree. Cette etude a demontre que la sequence de l'anticodon specifiait a elle seule la complexation de l'arnt a la mts, cette reconnaissance etant preponderante dans le processus de discrimination. Il est egalement montre que la structure generale de l'arnt contribue a orienter l'extremite acceptrice dans le site actif, demontrant ainsi l'effet - certes mineur - de l'etape catalytique dans la discrimination. La connaissance d'un point de contact possible de l'arnt#m#e#t avec la mts nous a permis, par mutagenese dirigee, de tester l'importance des residus de la region suspectee dans l'interaction de l'anticodon avec la mts. Parmi les residus testes, le residu w461 a ainsi ete montre indispensable a la reconnaissance de l'anticodon. En parallele, la mise en place d'un crible genetique a autorise l'isolement de bacteries exprimant des mts mutantes devenues capables d'aminoacyler un arnt#m#e#t portant une mutation rendant son anticodon anticomplementaire au codon de terminaison ambre. L'etude complete des enzymes mutantes ainsi que la determination de la sequence nucleotidique de leur gene ont permis de prouver que des mutations dans la region voisine du w461 (region 460) conditionnent l'aminoacylation par la mts de l'arnt mute. Ceci demontre que la region 460 (une quinzaine de residus) est le site d'interaction de l'enzyme avec l'anticodon. Des mutations dans une seconde region (region 211) peuvent alors, en accelerant l'etape catalytique, ameliorer les performances de ces enzymes suppresseurs