thesis

Mise en evidence d'un parametre predictif pour la specificite des amorces pcr et definition d'une methode de choix d'amorces basee sur la disparite de frequence des octameres dans le genome humain

Defense date:

Jan. 1, 1995

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Institution:

Paris 7

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Abstract FR:

Le succes des resultats obtenus par la reaction de polymerisation en chaine (pcr) depend etroitement de la specificite des amorces. Nous avons mis en evidence un parametre predictif pour la specificite des amorces pcr. Nous avons emis l'hypothese que les 8 nucleotides se trouvant a l'extremite 3' de l'amorce etaient responsables de la specificite de la pcr. Afin de verifier cette hypothese nous avons denombre les octameres se trouvant dans les banques de sequences humaines et nous avons etabli leur frequence. Nous avons alors utilise des amorces pcr de sequences tres proches mais dont la frequence de l'octamere situe en 3' est tres differente. Nous avons constate que les amorces ayant a leur extremite 3' un octamere frequent dans les banques de donnees humaines etaient a l'origine de nombreuses amplifications non specifiques dans l'adn humain alors que les amorces ayant a leur extremite 3' un octamere rare dans les banques de donnees humaines n'etaient a l'origine d'aucune amplification. Ce resultat suggere que pour la frequence des octameres les banques de sequences humaines soient representatives de l'ensemble du genome humain. Ce resultat permet d'envisager la specificite des amorces pcr comme etant la consequence de l'interaction dynamique de l'extremite 3' de l'amorce avec l'adn plutot que comme etant le resultat d'une hybridation stable de l'amorce sur la matrice. Cette observation nous a permis de definir une methode de choix d'amorces pour la pcr basee sur la disparite de frequence des octameres dans le genome humain.