Abstract FR:

L'objectif de notre travail est la recherche de nouvelles esterases/lipases thermostables ayant de nouvelles specificites. Pour cela, nous avons opte pour un criblage de neuf souches bacteriennes thermophiles initialement isolees dans le laboratoire. Toutes les souches ont ete capables de croitre sur un milieu mineral contenant le tween 80 comme seule source de carbone. Les trois souches lcb 38, 39 et 40 presentent une importante activite d'hydrolyse du p-nitrophenyle caprylate (pnpc8) et du p-nitrophenyle palmitate (pnpc16). Le criblage a permis de retenir une souche de bacillus licheniformis (lcb 40) ayant une importante activite lipolytique extracellulaire thermostable. Chez cette souche nous avons purifie (par fractionnement au sulfate d'ammonium suivi de chromatographies hydrophobe et gel filtration) quatre enzymes lipolytiques differentes. Il s'agit de deux carboxylesterases (130 et 32 kda, specifiques du pnpc4), d'une acetylesterase (65 kda, specifique du pnpc2) et d'une lipase (110 kda, specifique du pnpc16 et capable d'hydrolyser la trioleine). L'acetylesterase c'est revelee particulierement thermostable avec un temps de demi-vie d'une heure a 76c. Deux preparations actives esterase et lipase lyophilisees ont ete mises au point. En milieu organique, nous avons observe le comportement de ces enzymes en etudiant deux reactions differentes : l'hydrolyse d'esters de para-nitrophenyle et la synthese du butyrate d'ethyle. Il s'est avere que la thermostabilite des enzymes est nettement amelioree en milieu peu hydrate et que l'activite thermodynamique de l'eau (aw) est le parametre qui influence le plus l'activite enzymatique en milieu organique.