Abstract FR:

Le periplasme de escherichia coli renferme plusieurs phosphatases acides parmi lesquelles une phosphoanhydride phosphohydrolase (ec. 3. 6. 11) active a ph 2,5 dont le gene de structure est appa et dont la fonction physiologique est inconnue. Deux mutations de appa ont ete identifiees au niveau moleculaire par analyse de la sequence nucleotidique sur des plasmides recombines. La mutation appa1 qui diminue l'activite enzymatique specifique par 95 pour cent, substitue une valine par une methionine au voisinage immediat de la sequence arg-his-gly presumee constituer le site actif de l'enzyme et qui existe dans d'autres phosphatases acides d'origine eucaryotique. La mutation nulle appx, localisee dans la partie 3-terminale du gene est une mutation ambre ecourtant l'enzyme de 64 residus acides amines dont trois cysteines. Ceci montre l'importance de la partie c-terminale pour l'activite de la proteine. Ces mutations n'affectent pas la croissance dans les conditions usuelles: appa n'est donc pas indispensable. L'expression de appa est soumise in vivo a une regulation complexe par la disponibilite en phosphate mineral et en oxygene. A l'aide de fusions avec les genes phoa (phosphatase alcaline), cat (chloramphenicol acetyl-transferase) ou lacz (beta-galactosidase) sur des plasmides recombinants de differentes tailles ou sur le chromosome, nous montrons que appa est transcrit a partir de plusieurs promoteurs repartis sur un operon dans lequel ce gene occupe une position distale. Le promoteur p1, le plus proche de appa, possede une activite faible non soumise a une regulation. Le promoteur p2 qui transcrit 4 genes: orfc, orfb, orfx et appa est soumis a une regulation par la disponibilite en oxygene, sous reserve qu'un gene regulateur situe au moins 2 kilobases en amont de p2, soit present. Ce gene specifierait un represseur actif a la fois sur l'operon app et sur un autre gene ou operon transcrit dans le meme s