Abstract FR:

Nous avons montre qu'un seul type d'arn tyrosine hydroxylase (th) permettait d'obtenir la synthese d'une enzyme active a l'aide d'un systeme de transcription in vitro. Ce meme systeme a permis de produire les 4 types d'arn th humain apres clonage, mutagenese dirigee et construction, nous avons montre qu'ils codent pour 4 enzymes possedant des activites specifiques significativement differentes et que, produite dans la bacterie, ces enzymes sont phosphorylees differemment. Ces donnees suggerent que l'epissage alternatif pourrait jouer un role dans la regulation de l'expression de l'enzyme. La th de rat et la th-1 humaine ont ensuite ete exprimees dans des lignees cellulaires par transfection ou infection retrovirale. Une methode de selection en milieu sans tyrosine nous a permis d'obtenir de forts niveaux d'activite th par d'amplification genique. Les lignees cellulaires fibroblastiques et neuroendocriniennes liberent, respectivement, la dopa de facon constitutive et la dopamine de facon regulee par le calcium. Apres greffe dans le striatum de rat denerve de ses differences dopaminergiques, ces cellules modifiees genetiquement permettent une amelioration rapide du deficit moteur. Cet effet fonctionnel est correle a l'augmentation des taux de dopamine mesure apres greffe par la technique de microdialyse. Pour evaluer l'efficacite de cette approche a long terme, nous avons developpe une methode permettant d'exprimer la th dans des cellules astrogliales en culture primaire avec une bonne efficacite. Ces cellules produisent de la dopa sans apport de biopterine exogene. Apres transplantation, les cellules astrogliales induisent une amelioration du comportement rotatoire et continuent d'exprimer la th, 3 semaines apres greffe