Etude par photomarquage d'affinité du site de fixation des modulateurs stéroïdes sur la glycoprotéine-P humaine
Institution:
Lyon 1Disciplines:
Directors:
Abstract EN:
The multidrug resistance of tumor cells induced by the P-glycoprotein (Pgp), exporting various anticancer agents outside the cell is likely to be inhibited by progesterone and some of its analogs, this work has been aimed to characterize a binding site of this family of modulators on this protein. The strategy is based on photoaffinity labeling with photoaffinity reagents containing photoactivable chromophores coupled with three progesterone derivatives. We have synthesized two sets of photoaffinity ligands by peptide coupling of two arylazide chromophores (azidohydroxybenzoyl [AHB] and azidonitrobenzoyl [ANB]) with the three different C3-, C7-, and C11 - propylamino ether derivatives of progesterone or 5α-H dihydroprogesterone. We have shown that these photoaffinity reagents exhibit a modulatory effect on the MDR phenotype and produce successful and specific labeling on Pgp. The localization of labeled tryptic fragments of Pgp was carried out by MALDI-TOF mass spectrometry, and we have localized several labeling sites distributed in the cytoplasmic loops of the two halves of Pgp
Abstract FR:
La multichimiorésistance des cellules tumorales induite par la glycoprotéine-P (Pgp), exportant divers agents anticancéreux hors de la cellule étant susceptible d’être inhibée par la progestérone et certains de ses analogues, ce travail a eu pour but la caractérisation d’un site de fixation de cette famille de modulateurs sur cette protéine. La stratégie retenue repose sur des marquages d’affinité à l’aide de photomarqueurs comportant des chromophores photoactivables couplés en différentes positions de dérivés de progestérone. Nous avons synthétisé deux séries de photomarqueurs par couplage peptidique de deux chromophores arylazide (azidohydroxybenzoyl [AHB] et azidonitrobenzoyl [ANB]) avec les précurseurs propylamino éther en C3, C7 et C11 obtenus à partir de progestérone ou de 5α-H-dihydroprogestérone. Nous avons montré que ces photomarqueurs sont des modulateurs du phénotype MDR et produisent des marquages d’affinité spécifiques sur la Pgp. La localisation des photomarquages sur les peptides trypsiques de la Pgp a été réalisée par spectrométrie de masse MALDI-TOF, et nous avons identifié plusieurs sites de marquage spécifiques répartis au niveau des boucles cytoplasmiques des deux moitiés de la Pgp