thesis

Mecanismes de l'electrophorese de l'adn en double brins sur gels d'agarose

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Jan. 1, 1996

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Abstract FR:

Ce travail porte sur l'etude des mecanismes intervenant au cours de l'electrophorese de l'adn en double brins sur gels d'agarose. Pour celui-ci, nous avons utilise deux appareillages : la birefringence electrique qui traduit les changements d'anisotropie du systeme a l'etablissement et a la coupure du champ electrique et un montage de recouvrance de fluorescence apres photoblanchiment qui nous a permis de mesurer le coefficient de diffusion et, en presence de champ electrique, la mobilite electrophoretique associee au coefficient de dispersion. Grace au temps de reptation et au coefficient de diffusion, nous avons pu definir un domaine de reptation des chaines d'adn pour les differentes concentrations en gel d'agarose etudiees. Considerant celui-ci, l'etude approfondie de la mobilite electrophoretique et du coefficient de dispersion en fonction du champ electrique, de la concentration en agarose et de la longueur des chaines, a montre que le modele de la reptation biaisee incluant les fluctuations est le plus adapte pour la description de l'electrophorese de l'adn dans les gels d'agarose. De plus, l'utilisation de la microscopie a force atomique nous a permis de visualiser directement les gels d'agarose et de connaitre la distribution de tailles de pores pour les differentes concentrations en agarose. Ces tailles de pores ont pu etre comparees a celles calculees a partir de la mobilite extrapolee a champ nul. Cependant plusieurs problemes relatifs aux variations de certaines grandeurs (orientation du tube, coefficient de dispersion) avec la concentration en agarose sont apparus. Le modele de la brf ne decrit donc pas les variations observees en fonction de la taille des pores quand la chaine est suffisamment longue ou le champ fort, donc quand le suretirement des chaines devient non negligeable.