Abstract FR:

Les micro-organismes vivant dans des ecosystemes extremes sont devenus des reservoirs potentiels d'enzymes benefiques pour la biocatalyse. Les etudes menees visent a obtenir un outil enzymatique pouvant hydrolyser les proteines aux temperatures elevees et qui serait resistant aux differents agents de denaturation. Dans cet objectif, la ppa (protease de pyrococcus abyssi) a ete isolee et purifiee a partir du surnageant de culture d'une archaebacterie marine hyperthermophile, pyrococcus abyssi souche st 549. La purification a fait intervenir trois etapes chromatographiques impliquant des resines echangeuses d'ions. A l'issue de la purification, le rendement enzymatique etait de 4% et le facteur de purification de 890 fois. Cette protease est une protease a serine hydrolysant les proteines et les peptides avec une preference de coupure en position p1 et p'1 des residus aromatiques et hydrophobes. Son activite est optimale a 95#c et a ph 9. La ppa est relativement stable entre 90 et 100#c mais elle est peu stable au dela de 100#c(t#<1/2> = 270, 49, 39, 8 et 5 minutes respectivement a 90, 95, 99, 104 et 108#c). Le sds abaisse la temperature d'activite de la ppa mais diminue egalement sa thermostabilite. Le profil electrophoretique de la ppa observe par zymogramme suggere que cette enzyme existe sous differentes formes moleculaires. Trois d'entre elles predominent, de masses moleculaires apparentes 150, 105 et 60 kda. L'interdependance des bandes observees a ete revelee par le changement des conditions de denaturation des echantillons (temperature, concentration en sds) avant l'electrophorese. Les resultats obtenus par filtration moleculaire confirment la tendance tres prononcee de la ppa a l'agregation. A temperature ambiante elle se presenterait sous la forme d'un agregat de masse moleculaire voisine de 540 kda.