Abstract FR:

Le cytosquelette d'actine joue un role majeur dans les differentes phases d'activation plaquettaire au cours desquelles il subit de profondes reorganisations. Il se forme notamment des fibres de stress, qui s'ancrent a la membrane au niveau des zones d'adhesion focales organisees autour des integrines lors de l'agregation. Sachant que les phosphoinositide 3-kinases (pi3ks) jouent un role dans la stabilisation des zones d'adhesion focales durant l'agregation irreversible, nous avons recherche des cibles potentielles des produits de ces enzymes au niveau de ces structures. Grace a une etude de liaison in vitro nous avons mis en evidence une proteine qui interagit specifiquement avec deux des produits des pi3ks (le pi(3,4,5)p 3 et le pi(3,4)p 2) et qui presente les caracteristiques d'une gtpase rho. Cette observation nous a conduit a demontrer que ces seconds messagers lipidiques interagissent directement avec rac 1 et rhoa recombinantes, in vitro. Deux domaines potentiels de liaison ont ete identifies sur rac 1. Nous avons egalement observe que le pi(3,4,5)p 3 augmente fortement et de facon dose dependante la dissociation du gdp sur rac 1, in vitro. De plus, les produits des pi3ks sont necessaires pour la stabilisation de rac 1 a la membrane et pour son activation, dans des fibroblastes stimules par l'egf. Dans la deuxieme partie de ce travail nous avons montre que la rho-kinase n'est pas impliquee dans le changement de forme des plaquettes induit par le trap (thrombin receptor agonist peptide) mais qu'elle joue un role important dans l'agregation irreversible induite par cet agoniste. Le maintien de la phosphorylation tardive des chaines legeres de myosine est dependant de la rho-kinase et permet la stabilisation de la myosine du cytosquelette, un mecanisme lie a l'agregation irreversible. Enfin, nous avons montre que l'adp secrete par les plaquettes participe de facon majeure, via son recepteur couple a gi a l'activation de la rho-kinase en synergie avec le trap.