Expression en systeme eucaryote baculovirus et caracterisation des proteines structurales et non structurales du coronavirus de la gastroenterite transmissible du porc
Institution:
Paris 6Disciplines:
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Le virus de la gastroenterite transmissible (tgev) du porc appartient aux coronaviridae. Dans la premiere partie de ce travail, les genes codant pour la proteine de spicule s entiere ou des formes tronquees, ont ete inseres dans le genome du baculovirus (acnpv). L'infection de cellules d'insecte avec le baculovirus recombinant a permis la synthese d'un polypeptide de 175k (forme entiere) capable de trimeriser et qui est transporte a la surface des cellules d'une maniere semblable a celle observee avec la proteine tgev s. La proteine s mature (1431 a. A. ) et la proteine s1 (611 a. A. ) tronquee dans le domaine c-terminal presentent une reactivite antigenique comparable a la proteine s virale. La deletion des acides amines c-terminaux qui contiennent le domaine d'ancrage permet la secretion de la proteine. Dans la seconde partie, les capacites codantes des phases ouvertes de lecture orf3a, orf4 et orf7 du tgev ont ete confirmees par leur expression en cellules d'insecte. Un serum polyclonal dirige contre la proteine recombinante orf3a d'une part, et cinq ac. Mo. Diriges contre la proteine recombinante orf4 d'autre part, immunoprecipitent des polypeptides de 6,5k et 10k respectivement dans les cellules de mammifere infectees par le tgev. L'association de la proteine orf4 avec les membranes des cellules infectees a ete mis en evidence ainsi que la localisation de deux epitopes dans la sequence c-terminale de la proteine. L'observation d'une fluorescence de surface suggere que la proteine orf4 est inseree selon une orientation c exo - n endo. La presence de la proteine dans des preparations de particules de tgev a ete revelee (20 molecules par virion). La comparaison des sequences en acides amines des orfs presente chez les principaux membres de la famille indique la presence d'un polypeptide homologue a la proteine orf4 appelee sm (small membrane protein)