Abstract FR:

Les pectine méthyltransférases catalysent la méthylestérification des résidus d'acide galacturonique constitutifs des pectines. Les suspensions cellulaires de lin contiennent des enzymes ayant la capacité de catalyser la methylestérification des composés de type homogalacturonane mais aussi des composés pectiques plus complexes comme les RG-I, les RG-II, et les xylogalacturonanes. Deux activités ont été mises en évidence in vitro sur les homogalacturonanes : la PMT7 et la PMT5. La PMT7 est particulièrement active sur les homogalacturonanes fortement méthylestérifiés à pH7 et présente un pic d'activité pendant la phase rapide de croissance cellulaire. D'un point de vue physiologique, cette enzyme pourrait être responsable de la large méthylestérification des pectines. La PMT5 est quant à elle active à pH acide sur des homogalacturonanes de faible degré d'estérification (de 0,1). La PMT5 présente un pic d'activité durant la phase de latence et de maturation cellulaire. Pendant la phase de croissance, cette enzyme pourrait expliquer la présence concomitante dans les parois de pectines faiblement et fortement méthylestérifiées. Durant la maturation cellulaire, la PMT5 pourrait assurer une méthylestérification minimale. Un protocole de purification des pectine méthyltransférases a été établi et mis en oeuvre pour la purification de la PMT5 et de la PMT7, qui ont été caractérisées d'un point de vue catalytique et physico-chimique. La PMT5 et la PMT7 ont une affinité modérée pour la SAM (Km de 70 et 40 microM), et une faible affinité pour le substrat pectique (Km de 1,57 g/L et 0,68 g/L). Ces deux enzymes présentent in vitro des Vmax de 0,45 et 0,25 nkatal par mg de protéines. La SAH est un inhibiteur compétitif des PMTs (Ki de 1,77 et 4,1 microM) alors que les polymères pectiques de DE 1 agissent comme des inhibiteurs non compétitifs (Ki de 20 g/L et de 29,8 g/L). La PMT5 a une masse moléculaire native de 40 kDa et un pI de 6,3 alors que la PMT7 présente une masse moléculaire native de 120 kDa et un pI de 8,9. Ces deux protéines libèrent spontanément un monomère actif de 18 kDa et de pI acide (4,3). En SDS-PAGE, une seule bande protéique de 18 kDa est identifiée pour la PMT7 et la PMT5. Cette bande protéique est photomarquée lorsque les protéines purifiées sont traitées en présence de S-adénosyl-L-[méthyle 14C]-méthionine sous UV.