Abstract FR:

Pseudomonas aeruginosa est une bacterie responsable d'infections opportunistes et de graves surinfections chez les malades atteints de mucoviscidose. La protease alcaline est l'un des facteurs de virulence de la bacterie. Cette enzyme est une metalloprotease a zinc de la famille de la serralysine (e. C. 3. 4. 24. 40. ). Les methodes existantes a ce jour pour mesurer l'activite proteolytique ne permettent pas un dosage selectif de son activite dans des surnageants de culture de p. Aeruginosa, du fait de l'existence d'une autre protease de specificite comparable: l'elastase. La premiere partie de nos travaux a consiste a etudier l'hydrolyse de differents peptides dont certains possedent une activite biologique (substance p, angiotensine. . . ) et a determiner les sites d'hydrolyse. Cette etude a permis de preciser la specificite de l'enzyme. Elle possede une specificite large, mais la presence de residus aminoacides hydrophobes en position p'1 ainsi que celle d'acides amines basiques en position p#1 ou p#2 est favorable a son activite. Au vu de ces resultats, un substrat a ete propose pour une mesure precise et reproductible de l'activite de la protease. L'utilisation d'un inhibiteur de l'elastase a rendu le dosage encore plus specifique vis-a-vis de la protease alcaline. Nous avons valide un protocole en mesurant l'activite enzymatique dans des surnageants de culture de souches pathogenes. Nous avons egalement pu a la fois mettre en evidence et estimer la quantite de protease presente dans les surnageants a partir des resultats de deux methodes immunochimiques, une immunodecoration et un dosage elisa en double sandwich