Abstract FR:

Dans cette these, nous nous sommes interesses a divers aspects concernant la structure moleculaire de l'acetylcholinesterase. Dans une premiere partie nous avons cherche a caracteriser l'ancrage membranaire de la forme majeure d'acetylcholinesterase du cerveau de mammiferes, qui comporte une sous-unite structurale hydrophobe de 20 kda, liee a un tetramere de sous-unites catalytiques de type t. Nous avons clone un adnc qui pourrait coder pour cette proteine, mais les experiences de co-transfection que nous avons realisees n'ont pas permis de reconstituer l'assemblage de cette proteine avec les tetrameres t. Dans une deuxieme partie, nous nous sommes interesses a l'acetylcholinesterase de certains serpents, dont le venin possede une forte activite de cette enzyme. Il s'agit d'une forme moleculaire inhabituelle, correspondant a des monomeres solubles. Nous avons clone cette enzyme chez le bungare (bungarus fasciatus) et montre que sa region c-terminale est codee par un nouvel exon alternatif, qui code pour un petit peptide hydrophile ce qui explique que l'acetylcholinesterase de venin forme des monomeres solubles. Nous avons egalement caracterise et clone l'acetylcholinesterase du muscle de bungare, et montre qu'il s'agit d'une sous-unite t, comme chez les autres vertebres. La comparaison de la sequence d'acetylcholinesterase de bungare avec celles d'acetylcholinesterases d'autres vertebres, a permis de mettre en evidence deux differences majeures, une methionine en position 70 au lieu d'une tyrosine, et une lysine en position 285 au lieu d'une residu acide. Le remplacement par mutagenese dirigee de ces acides amines dans l'acetylcholinesterase de bungare par leurs homologues chez la torpille et l'expression dans les cellules cos permet d'obtenir une enzyme possedant les proprietes de l'acetylcholinesterase de torpille vis-a-vis des ligands du site peripherique. Parallelement a ces travaux experimentaux, nous avons mis en place une banque de donnees accessible par internet et dediee aux cholinesterases