thesis

Contribution a l'etude d'un enzyme multifonctionnel, la leucyl tarn synthetase mitochondriale(nam2) de la levure saccharomyces cerevisiae

Defense date:

Jan. 1, 1992

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Institution:

Paris 6

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Authors:

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Abstract FR:

L'essentiel du travail que j'ai realise est consacre a l'etude de deux genes nucleaires: le gene nam2 chez s. Cerevisiae et le gene cbp2 chez s. Douglasii qui participent au controle de l'expression des genomes mitochondriaux. Le gene nam2 joue un role essentiel dans l'epissage des introns mitochondriaux et s'est revele coder pour la leucyl-tarn synthetase mitochondriale (mlrs). Nous avons construit, in vitro, toute une serie de mutations dans les regions high, gwd et kmsks conservees dans les aminoacyl-tarn synthetases de groupe i et dans la region autour du residu glycine 240 importante pour l'activite suppresseur. Nous avons analyse les mutants par des methodes genetiques et biochimiques. Nous avons montre que les residus importants dans les regions high, gwd et kmsks sont essentiels pour l'activite de mlrs et n'affecte pas l'excision des arn mitochondriaux. Plusieurs nouvelles mutations suppresseurs ont ete identifiees dans la region autour du residue 240, et le mutant 238c affecte l'excision l'intron bi4. Cette region semble donc importante pour l'epissage des pre-marn et l'activite suppresseur. Nous avons clone et sequence le gene cbp2 chez s. Douglasii, qui est tres homologue fonctionnement et structurellement au gene cbp2 de s. Cerevisiae. Il y a 87% d'acides amines identiques et 14% de substitutions nucleotidiques avec trois fois plus de transversions que de transitions. La disruption du gene cbp2 dans deux souches de s. Douglasii contenant soit le genome mitochondrial sauvage avec introns soit le genome sans intron a montre que le gene cbp2 n'est pas essentiel a la croissance respiratoire en presence d'un genome mitochondrial sauvage sans intron. Les genes cbp2 chez s. Cerevisiae et s. Douglasii sont completement interchangeables pour leurs fonctions