Abstract FR:

La 5-nucleotidase cytosolique de foie de buf a ete purifiee a l'homogeneite par une double chromatographie d'affinite sur concanavaline a sepharose, puis 5-amp sepharose. L'enzyme purifie est un heterodimere de 130000 daltons avec deux sous-unites de 57000 et 65000 daltons, contrairement a l'isoenzyme membranaire qui presente une structure homodimerique (140000 daltons). L'enzyme hydrolyse specifiquement les 5-mononucleotides et le 5-cmp serait son meilleur substrat. Son activite maximale intervient a ph 7,5 et 9,5, et necessite l'apport de cations divalents exogenes. Par contre, la 5-nucleotidase membranaire ne possede qu'un seul ph optimum a 7,5. L'etude des interactions des diverses lectines avec le glycanne de la 5-nucleotidase cytosolique prouve sa nature glycoproteique, et suggere une structure glycannique differente de l'enzyme membranaire. Cependant, les anticorps produits contre la 5-nucleotidase membranaire reconnaissent et inhibent l'enzyme cytosolique. Cette reactivite croisee demontre l'existence d'epitopes communs proches du site catalytique. Par ailleurs, nous avons realise une etude de l'effet de la phospholipase c specifique du phosphatidylinositol (pi-plc) sur l'attachement de la 5-nucleotidase a la membrane plasmique. Nous avons ainsi montre que seule une faible proportion de la molecule est convertie en une forme soluble par ce traitement. De plus, nous avons note une grande variation de sensibilite a l'action de la pi-plc entre la 5-nucleotidase et la phosphatase alcaline, dependante de la nature du tissu et de l'espece etudiee. Les differences de pourcentage de solubilisation des deux enzymes par la pi-plc pourraient etre dues a des raisons d'ordre sterique liees a la topographie des proteines dans la membrane plasmique ou a un polymorphisme d'ancrage de ces proteines dans la membrane