Abstract FR:

Hotfoot (ho) est une mutation autosomique recessive de la souris, localisee sur le chromosome 6, dont le phenotype presente les caracteristiques d'une ataxie cerebelleuse. Mon travail de these a porte sur le clonage du gene responsable du phenotype hotfoot. Pour cela, nous disposions de deux alleles mutants : un allele resultant d'une insertion transgenique, ho t g n 3 7 i n r a, et un allele apparu spontanement au jackson laboratory, ho 4 j. Pour le clonage de ce gene, nous avons mis en oeuvre deux strategies distinctes. La premiere est une approche par clonage positionnel classique, la deuxieme est une approche par clonage des sequences genomiques flanquant l'insertion transgenique. Nous avons, dans un premier temps, effectue la cartographie genetique a haute resolution de la mutation hotfoot. 351 animaux issus d'un intercross ont ete types pour de nombreux marqueurs microsatellites du chromosome 6. La region dans laquelle est localise le locus hotfoot a ete limitee a un intervalle de 1,1 cm entre les marqueurs d6mit122 et d6mit174. Parallelement a la cartographie genetique, nous avons isole, a l'aide de chromosomes artificiels de bacteries (bac), la region voisine du site d'insertion du transgene. 18 kb d'adn genomique autour du site d'insertion ont ete sequences. Aucun gene candidat n'a ete trouve dans ces 18 kb. Une autre mutation de souris affectant le cervelet, la mutation semi dominante lurcher (lc), a ete localisee dans la meme region que la mutation hotfoot. Lc a ete clonee recemment et attribuee a une mutation dans le gene du recepteur ionotropique au glutamate 2 (grid2). Nous avons donc decide de tester le gene grid2 comme gene candidat. Nous avons mis en evidence, chez les souris porteuses de l'allele ho t g n 3 7 i n r a, une deletion de la majeure partie de la sequence codante dans l'arnm de grid2 et une deletion de 510 paires de bases dans la sequence codante chez les souris porteuses de l'allele ho 4 j. Le gene grid2 est donc le gene responsable de la mutation hotfoot.