Abstract FR:

Pseudomonas aeruginosa est une bacterie pathogene opportuniste pouvant entrainer des infections graves, surtout au niveau des poumons des malades atteints de mucoviscidose. Sous l'effet de facteurs environnementaux, les bacteries vont produire des exopolysaccharides, les alginates, facteur important de la virulence de la bacterie. Les alginates sont des polymeres d'acides d-mannuronique et l-guluronique en liaison 1-4. Ils sont hydrolyses par un enzyme specifique, l'alginate lyase, qui catalyse une reaction de -elimination entre deux residus d-mannurosyl ou l-gulurosyl. Une activite alginolytique a ete mise en evidence chez deux souches mucoides de p. Aeruginosa. Cette activite est portee par une proteine homodimerique de 130 kda, intracellulaire en association avec la face interne de la membrane cytoplasmique. Le gene de structure de l'alginate lyase a ete clone a partir d'une banque d'adn genomique construite dans l'adn du phage lambda gt 11. Le gene algl, porte par un fragment de 4,4 kpb, est exprime chez e. Coli y 1090 en une proteine de 130 kda. Le sous-clonage de fragment de 4,4 kpb dans le gene cat du plasmide pbr 329 nous a permis de construire la carte de restriction du fragment, et de montrer que ce gene introduit chez e. Coli mc 1061, etait exprime, ce qui suggere que le gene a ete clone avec son propre promoteur. Les sous-clonages du fragment entier et de fragments de restriction, puis le clonage de fragments issus de l'hydrolyse controlee de l'insert de 4,4 kpb par la dnase i nous ont permis de determiner la totalite de la sequence nucleotidique. L'analyse de la sequence a revele la presence d'une phase ouverte de lecture de 2052 nucleotides, codant pour une proteine de poids moleculaire predit de 74 kda qui est en accord avec celui du monomere de l'alginate lyase determine par electrophorese sur gel sds, et qui doit correspondre au gene algl. De plus, la presence de sequences de fixation des ribosomes et de l'arn polymerase confirment que le gene algl possede son propre promoteur. Ces resultats montrent que l'alginate lyase mise en evidence est differente de celles caracterises chez d'autres souches de p. Aeruginosa