Abstract FR:

L'echangeur na#+/h#+ nhe1 est une proteine transmembranaire, ubiquitairement exprimee dans les cellules eucaryotes. Ce transporteur, active par les facteurs de croissance et bloque par un diuretique antihypertenseur, l'amiloride, joue un role crucial dans la regulation du ph et du volume cellulaires. D'autres isoformes (nhe2, nhe3), exprimees sur la face apicale de cellules epitheliales de rein et d'intestin possedent une sensibilite plus faible pour l'amiloride et sont specialisees dans les transports transepitheliaux. L'identification d'acides amines impliques dans l'interaction des echangeurs na#+/h#+ avec l'amiloride a ete rendue possible par l'approche genetique suivante: 1) clonage de l'adnc codant pour l'isoforme nhe1 des fibroblastes ar300 selectionnes pour leur resistance a l'amiloride. Ces cellules surexpriment un echangeur mute ayant une affinite reduite pour cet inhibiteur; 2) identification d'une mutation ponctuelle (l167f) dans le quatrieme domaine transmembranaire de l'echangeur par comparaison de sequence entre l'adnc codant pour l'echangeur mute et l'adnc sauvage. Cette seule mutation est responsable de la diminution d'affinite pour l'amiloride; 3) des experiences de mutagenese dirigee ont permis de localiser un autre residu de l'echangeur (f165) intervenant dans le transport du sodium et dans l'interaction avec l'amiloride; 4) il a ete demontre que l'acquisition du phenotype de resistance des cellules ar300 s'est faite par l'apparition de la mutation l167f sur un des deux alleles de l'echangeur, puis par amplification genique de l'allele mute. Cet adnc mute conferant une resistance a l'amiloride a ete utilise comme marqueur pour la construction d'un vecteur universel de selection pour cellules eucaryotes. Un nouvel inhibiteur aux proprietes anti-ischemiques a ete teste sur les isoformes nhe1, nhe2 et nhe3. Il s'est revele beaucoup plus discriminatif que l'amiloride et ses derives 5-n substitues. Le gene de l'echangeur na#+/h#+ nhe1 a ete clone. Son organisation en introns et exons a ete determinee. L'identification de son promoteur a permis la mise en evidence de sites consensus de liaison pour certains facteurs de transcription