Abstract FR:

Dans les cellules, les arns subissent toujours apres leur transcription, differentes etapes de maturation. Les arn de transfert (arnt) matures ont la particularite de comporter un grand nombre de nucleotides modifies dans leurs sequences (modifications chimiques de la base ou du ribose). Chaque modification est catalysee par une ou plusieurs enzymes de modification des arnt extremement specifiques. Dans la premiere partie de mon travail, j'ai entrepris l'etude de l'arnt : pseudouridine-55 synthase (pus4) de levure qui est une enzyme de modification catalysant l'isomerisation d'uridine en pseudouridine a la position 55 de la quasi totalite des arnt d'une cellule. J'ai determine les elements d'identite de l'arn requis par l'enzyme pus4 pour la formation de la pseudouridine-55, en utilisant des variants de l'arnt-aspartique de la levure ainsi que des arn viraux de plantes et ribosomaux. Le substrat arn minimum capable d'etre modifie, est constitue de 13 nucleotides avec certains nucleotides essentiels. L'enzyme pus4 a ete obtenue apres clonage du gene correspondant et surexpression de la proteine recombinante chez e. Coli. J'ai ensuite realise des experiences de marquage de photoaffinite entre l'enzyme pus4 et le minisubstrat arn dans lequel une 4-thiouridine a ete introduite par synthese chimique. La deuxieme partie de mon travail a permis de montrer que l'inosine et la n#1-methylinosine dans la boucle anticodon de l'arnt-alanine de b. Mori constituent les elements d'identite majeurs (epitope) pour la reconnaissance de l'arnt-alanine par les auto-anticorps polyclonaux presents dans le serum de malades atteints de myosite du type pl-12. Pour ce faire, j'ai realise des tests d'immmunoprecipitation entre les auto-anticorps et des oligonucleotides synthetiques substitues chimiquement par les nucleotides modifies inosine et n#1-methylinosine (derives de l'adenosine obtenus par reaction de desamination et de methylation).