Abstract FR:

Avec la connaissance du genome complet de saccharomyces cerevisiae, l'etude de la levure necessite maintenant de nouvelles technologies d'analyse fonctionnelle globale. L'electrophorese bidimensionnelle (e-2d) est l'un des outils appropries. Cette technique permet d'obtenir des informations sur le produit des genes, son expression, sa regulation, ou encore ses modifications post-traductionnelles. Nous avons mis au point une technique pour identifier le maximum de proteines visibles sur gel en mesurant le pi, la masse moleculaire et la composition partielle en acides amines de chacune des proteines a identifier. Cette composition partielle est obtenue par double marquage specifique realise in vivo avec des acides amines radioactifs. La methode a permis 90 nouvelles identifications et la creation d'une carte de reference. Nous avons utilise cette carte de reference pour etudier des modifications post-traductionnelles telles que la phosphorylation ou la degradation qui sont au cur des mecanismes de regulation cellulaire. Les proteines les plus abondantes de la levure sont aussi les plus stables dans les conditions testees. Nous avons ensuite utilise l'approche proteomique pour caracteriser le mutant d'arn polymerase ii rpb4. Ce mutant thermosensible n'est pas implique dans la reponse aux stress, mais est un mutant de fonction : a temperature restrictive, la polymerase depourvue de rpb4p est incapable de transcrire. Un des roles majeurs de rpb4p serait de stabiliser la sous-unite essentielle rpb7p dans l'arn polymerase ii. Par ailleurs, rpb4p interagirait potentiellement avec deux proteines (yhr115cp et ynl116wp) de fonction inconnue. Notre travail a donc permis de mettre en place les donnees preliminaires indispensables au developpement de l'approche proteomique chez s. Cerevisiae et a valoriser cet outil d'analyse globale.