thesis

Etude genetique de la cyanobacterie synechocyctis pcc 6803 : recherche de mutantssurproducteurs d'acides amines et developpement d'un vecteur de clonage integratif dans le chromosome

Defense date:

Jan. 1, 1989

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Institution:

Paris 6

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Ce travail concerne l'etude genetique de la cyanobacterie synechocystis pcc 6803, souche transformable et radioresistante qui a ete choisie au laboratoire pour produire des molecules marquees au #1#4c par voie biologique. Dans un premier temps, la recherche de mutants resistant aux analogues toxiques d'acides amines a permis l'obtention: (1) de mutants surproducteurs et excreteurs d'acides amines dont certains (les mutants resistants a la p-fluorophenylalanine) produisent des quantites importantes de phenylalanine. (2) de mutants deficients dans le transport des acides amines dont l'analyse a permis une premiere caracterisation du transport actif es acides amines chez les cyanobacteries. Dans un deuxieme temps, l'etude de la transformation chez cet organisme confirme que l'adn etranger s'integre dans le genome de l'hote par recombinaison homologue de type conversion genique (ou double crossing-over). Ce mecanisme est aussi a la base d'un procede de transformation mutagene qui permet d'integrer des genes de resistance aux antibiotiques au hasard dans le genome de pcc 6803. L'adn d'un des transformants a ete utilise pour developper un vecteur dirigeant l'integration de genes en un site defini du chromosome. D'un point de vue pratique, ces resultats permettent d'envisager plusieurs applications en ce qui concerne le marquage de molecules au #1#4c par voie biologique: (1) produire de la phenylalanine recuperable dans le milieu de cultgure. (2) cloner un gene etranger (codant pour une hormone polypeptidique par exemple) dans le chromosome de pcc 6803 en utilisant le vecteur d'integration mentionne plus haut