Mise au point de gels pour la chromatographie d'affinite d'un cytochrome p-450 : la cinnamate-4 hydroxylase
Institution:
Université Louis Pasteur (Strasbourg) (1971-2008)Disciplines:
Directors:
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Abstract FR:
Les proprietes selectives et specifiques des substrats ont ete exploitees pour purifier une enzyme vegetale: la cinnamate-4 hydroxylase localisee dans les microsomes des tubercules de topinambour. Cinq supports a base d'agarose ont ete prepares. Ils ont ete modifies par l'acide transhydroxycinnamique. Ils se differencient les uns des autres par la structure chimique et la longueur de bras. L'efficacite de ces gels en chromatographie d'affinite a ete testee. Une fraction enrichie en ca4h presente par electrophorese une bande vers 56 000 daltons caracteristique des cytochromes p 450. Une autre matrice susceptible de supporter les pressions elevees a ete synthetisee. Elle est a base de silice enrobee par un alcool polyvinylique prealablement modifie. Elle a permis d'acceder a un taux de greffage superieur a ceux obtenus sur l'agarose. Ce gel a permis, comme le precedent, la separation par chromatographie d'affinite du cytochrome p 450. Ce support chromatographique a le merite supplementaire de resister a la pression