Abstract FR:

La levane saccharase de bacillus subtilis est une transfructosylase secretee durant la phase exponentielle de croissance selon un mecanisme a deux etapes dans lequel la flexibilite conformationnelle intrinseque de la proteine jouerait un role important. Ces proprietes liees a la structure de la partie mature ont-elles une implication dans la secretion heterologue ? afin de determiner le role respectif de la sequence signal et de la partie mature dans les mecanismes de secretion heterologue, mais aussi afin de determiner les effets eventuels de la n-glycosylation sur l'activite enzymatique, nous avons exprime le gene de structure de la proteine dans la levure saccharomyces cerevisiae. La sequence signal de la levane saccharase ainsi que celles d'exoproteines de s. Cerevisiae (phosphatase acide et invertase) couplees a la partie mature de la proteine ne lui permettent pas d'entrer dans la voie de secretion de la levure. La sequence signal de l'alpha-amylase de bacillus amyloliquefaciens permet a la levane saccharase de penetrer dans la lumiere du reticulum endoplasmique ou elle est glycosylee. Le caractere plus hydrophobe de cette sequence signal pourrait etre responsable de cette translocation effective. La proteine heterologue n'est cependant pas secretee. La glycosylation a pour effet de diminuer l'activite polymerase de l'enzyme ainsi que de reduire l'efficacite de detection par les anticorps. La levane saccharase en l'absence de clivage de son extension n-terminale dans la levure est associee a la membrane cytoplasmique. La purification a l'echelle du milligramme de ce precurseur ainsi accumule nous a permis d'etudier sa cinetique de repliement. La presence de la sequence signal n'affecte pas la vitesse de repliement de la proteine. Cependant le processus de repliement du precurseur et celui de la forme mature pourraient avoir un cheminement different d'un point de vue moleculaire