Abstract FR:

Chez les oleagineux, les triglycerides de reserve sont stockes dans la graine sous forme de petits organites appeles oleosomes. Ils sont englobes par une mono-couche de phospholipides dans laquelle sont inserees des proteines specifiques (oleosines). Il ete propose que les oleosomes et l'oleosine sont synthetises et associes sur la membrane du reticulum endoplasmique (re), ce qui implique l'adressage de l'oleosine vers ce compartiment cellulaire. Il a egalement ete suggere que ce processus pourrait etre co-traductionnel et realise par l'intermediaire du srp (signal recognition particle). Afin de verifier cette hypothese, et d'essayer de localiser precisement sur la proteine la sequence signal impliquee, differentes deletions n- and c-terminus ont ete generees par pcr, en utilisant comme matrice un adnc codant pour une oleosine de graine de tournesol. Il a ete suggere que cette sequence signal se trouve a l'interieur d'un domaine central hydrophobe sur la proteine, et la plupart des deletions realisees codent pour des polypeptides tronques dont une partie de ce domaine est manquante. Apres clonage, la proteine complete et les deletions ont ete exprimees in vitro, chez la levure (saccharomyces cerevisiae) et dans des plants transgeniques d'arabidopsis thaliana. L'expression de l'oleosine complete dans des souches de levure mutantes a permis de confirmer, le role du srp dans l'adressage de l'oleosine vers la membrane du re, et d'identifier d'autres elements de l'appareil de translocation impliques dans ce processus. Des tests d'adressage et d'insertion membranaire in vitro ont permis de localiser une region dans le domaine central de l'oleosine qui semble contenir la sequence signal reconnue par le srp. Des experiences de fractionnement cellulaire ont alors permis d'etudier l'adressage potentiel et les proprietes d'insertion membranaire in vivo de chacune des deletions realisees. Les resultats obtenus in vivo ont permis de confirmer ceux precedement obtenus in vitro et une sequence signal impliquee dans l'adressage et l'ancrage de l'oleosine dans la membrane du re a pu etre identifiee.