Abstract FR:

Cette these est consacree a l'etude des fonctions de deux proteines: la fkbp25, qui est une immunophiline, et le mif, une cytokine. Les immunophilines sont les proteines acceptrices, intracellulaires pour la plupart d'entre elles, des immunosuppresseurs que sont la cyclosporine a, le fk506 et la rapamycine. Ces derniers empechent l'activation du lymphocyte t, consecutive au contact avec un immunogene, et bloquent ainsi la reponse immunitaire. Nous avons, dans un premier temps, purifie la fkbp25 bovine a partir d'organes et obtenu un antiserum de lapin. Nous avons ainsi montre apres analyse par une technique d'immunotransfert de fractions cellulaires, que la fkbp25 est, du moins dans le lymphocyte t, une proteine nucleaire. De plus, elle lie in vitro l'adn contrairement a la fkbp12, une autre immunophiline, de sequence en acides amines proche. La comparaison des sequences de ces deux proteines suggere que le site potentiel de liaison a l'adn se trouve localise dans le domaine n-terminal de la fkbp25. Nous avons de plus identifie dans cette region un site potentiel de liaison a l'adn de type helix-loop-helix. Il est donc possible que la fkbp25 soit impliquee dans les mecanismes nucleaires conduisant a la division et a la proliferation de la cellule. La deuxieme proteine que nous avons etudiee est le mif (macrophage migration inhibitory factor). Elle est la premiere cytokine decrite et inhibe in vitro la migration des macrophages a l'exterieur de tubes capillaires. Nous avons montre, grace a un serum polyclonal de lapin anti-mif bovin, que le mif est present dans les lymphocytes t et b, dans les macrophages et dans les fibroblastes. Il est aussi distribue dans tous les organes que nous avons etudies, c'est-a-dire le cur, le cerveau, le poumon, la rate, le rein et le foie. Aucune specificite pour une cellule ou un organe du systeme immunitaire n'a ete mise en evidence. Le mif semble donc etre et ce, contrairement aux cytokines, une proteine constitutive et ubiquiste dans les cellules et organes de mammiferes. Enfin, dans les lymphocytes t, nous avons etabli qu'il existe au moins deux isoformes de la proteine mif. Le mif est decrit comme etant secrete par le lymphocyte t ou le macrophage active. Pourtant, dans nos tests, nous n'avons pas detecte de secretion de mif par trois lignees de lymphocytes t, de macrophages humain et murin. Nous avons aussi montre que le mif n'induit pas la synthese de molecules de classe ii du cmh chez le macrophage, contrairement a ce qui avait ete decrit dans la litterature. Le mif bovin natif et le mifr humain n'ont pas d'activite d'inhibition de la migration des macrophages. Nous rejoignons en cela les travaux de plusieurs autres equipes. Enfin, le mif bovin natif n'a pas l'activite glutathion-s-transferase decrite pour le mif de rat, et ne lie pas le glutathion. Nous avons aussi montre qu'il existe dans le serum, au moins une proteine de liaison du mif, dont la sequence n-terminale est identique a celle de l'albumine. Nous pensons que cette proteine est la sarcolectine. Ces travaux, associes a ceux d'autres equipes, montrent, d'une part, que le mif n'est probablement pas une cytokine, et d'autre part, que son activite d'inhibition de la migration des macrophages est largement contestable