Abstract FR:

L'expression des genes du metabolisme des acides amines soufres chez la levure saccharomyces cerevisiae est soumise a une regulation negative specifique: la transcription de ces genes est reprime lorsque la concentration intracellulaire de s-adenosylmethionine (sam) augmente. Quatre facteurs transcriptionnels impliques dans cette regulation ont ete identifies: cbf1 (centromere binding factor 1), un facteur multi-fonctionnel a motif region basique-helice-boucle-helice (bhlh) qui se fixe de facon specifique sur la sequence consensus cacgtg, et qui est egalement implique dans la segregation des chromosomes (la sequence cacgtg est presente dans la region promotrice de tous les genes du metabolisme des acides amines soufres ainsi que dans tous les centromeres de saccharomyces cerevisiae) ; met4 et met28, deux facteurs specifiques a motif region basique-leucine zipper (bzip) ; et met30, un facteur essentiel a motif wd40. Parmi ces quatre facteurs transcriptionnels, seule la proteine met4 possede une fonction d'activation de la transcription. Nous avons montre que la regulation de la transcription des genes du metabolisme des acides amines soufres repose en partie sur une regulation de la fonction d'activation de met4. Une analyse fonctionnelle detaillee a permis d'identifier dans met4 un domaine d'activation unique, acide et riche en asparagine, qui fonctionne de facon constitutive, et a montre que la regulation de la fonction de ce domaine fait intervenir un domaine d'inhibition et un domaine auxiliaire. Nous avons montre que la proteine met30 est un inhibiteur transcriptionnel qui interagit avec le domaine d'inhibition de met4 et permet l'inhibition du domaine d'activation lorsque la concentration intracellulaire de sam est elevee. Nous avons montre que l'activation de la transcription des genes du metabolisme des acides amines soufres resulte de l'assemblage, au niveau des sequences cacgtg, d'un complexe heteromerique contenant cbf1, met4 et met28. Au sein de ce complexe, met4 et met28 interagissent par l'intermediaire de leur motif leucine zipper, et met4 et cbf1 interagissent par l'intermediaire du motif leucine zipper de met4 et du motif bhlh de cbf1. L'etude in vitro des mecanismes d'assemblage du complexe cbf1-met4-met28 a montre que met28 stimule la fixation de cbf1 sur la sequence cacgtg. De plus, nous avons montre que la transcription du gene met28 fait intervenir les proteines cbf1, met4 et met28, et qu'elle est reprime lorsque la concentration intracellulaire de sam augmente. Ces resultats montrent que la regulation de la transcription des genes du metabolisme des acides amines soufres chez saccharomyces cerevisiae met en jeu une boucle de regulation positive