Abstract FR:

Le clonage des adn complementaires et l'analyse des arn messagers codants pour l'acetylcholinesterase a mis en evidence un mecanisme d'epissage alternatif qui engendre au moins deux types de sequences codantes composees de deux exons communs suivis d'un exon alternatif h ou t. L'exon h code pour la region c-terminale de la sous-unite h composee de 31 acides amines largement hydrophobes, dont 29 seront echanges contre une ancre glycolipidique. L'exon t code pour les 40 acides amines qui constituent la region c-terminale de la sous-unite t. L'expression dans les cellules cos des deux exons communs suivis de l'exon h a montre que la presence de ce dernier entraine principalement la production d'une forme moleculaire dimerique, ancree par un glycolipide a la surface des membranes cellulaires. L'expression des exons communs suivis de l'exon t permet d'observer l'apparition de formes moleculaires monomeriques, dimeriques et tetrameriques dont certaines interagissent avec les detergents et sont donc definies comme amphiphiles. Ces resultats ont permis la definition d'une nouvelle nomenclature concernant les sous-unites catalytiques qui constituent les differentes formes moleculaires de l'acetylcholinesterase. Le clonage et l'expression de la sous-unite structurale qui, associee en triple helice par des ponts disulfures, compose la queue collagenique ont montre que cette sous-unite est seule responsable de la production des formes asymetriques. L'expression specifique de ces formes dans les tissus nerveux et musculaires n'est donc determinee que par la production de cette sous-unite structurale. Les formes asymetriques resultent de l'association de la region c-terminale de la sous-unite t a la region n-terminale de la sous-unite collagenique, comme nous le demontrons a l'aide de l'expression d'une construction chimerique de la sous-unite structurale et d'une construction deletee de la sous-unite catalytique t. La comparaison des sequences primaires des cholinesterases a permis de definir un domaine d'homologie d'environ 500 acides amines partage par d'autres proteines dont certaines sont depourvues d'activite catalytique mais peuvent intervenir dans des mecanismes d'adherence et d'autres sont des hydrolases a serine comme les cholinesterases. Ce domaine definit une famille de proteines cholinesterase-like pouvant deriver d'un ancetre commun portant a la fois une fonction catalytique et une fonction d'adherence. Ceci suggere que les cholinesterases pourraient porter ces deux types de fonctions. L'analyse de ce domaine commun a egalement suggere le role essentiel pour l'activite catalytique de l'acide aspartique 397 et de l'acide glutamique 327. L'importance de ces deux acides amines a ete demontree par mutagenese dirigee. L'analyse cristallographique suggere que l'acide aspartique 397 intervient dans la stabilisation de la conformation de l'enzyme alors que l'acide glutamique 327, lui, est un partenaire de la triade catalytique