Abstract FR:

La differenciation des lymphocytes b dans la moelle osseuse chez l'homme implique l'etablissement de contacts etroits avec les cellules stromales. Elle peut etre subdivisee en trois stades majeurs successifs, prob (l+), preb (+l+:recepteur preb) et b immature (+/+). Nous cherchons a elucider la structure de la pseudo chaine legere (l:like+vpreb) et du recepteur preb, et a etudier la mise en place de la signalisation par ce recepteur en determinant s'il est directement implique dans les interactions avec le stroma medullaire. Le recepteur preb est implique dans l'amplification du compartiment preb, dans l'exclusion allelique au locus des chaines , et potentiellement dans l'initiation des rearrangements aux locus des chaines legeres. Pour realiser cette etude au niveau clonal, nous avons etabli des lignees stromales stables en culture in vitro, immortalisees par transfection avec une forme thermosensible de l'antigene t du virus sv40 place sous le controle du promoteur de la metallotionine inductible par le zinc. Parmi plus de 45 lignees stromales immortalisees obtenues, 6 ont ete precisement etudiees en raison de leurs capacites de proliferation in vitro. Ces lignees presentent la capacite remarquable de maintenir et d'amplifier in vitro les precurseurs cd34+, tout en permettant, de facon neanmoins peu efficace, l'engagement d'une partie de ces precurseurs dans la differenciation b. La proteine vpreb, la l, deux fd (domaines vh-ch1 de deux chaines lourdes differentes) et les formes solubles des recepteurs preb correspondants (l+fd), ont ete produits sous forme recombinante dans des cellules d'insectes en utilisant comme vecteurs d'expression des baculovirus recombinants. L'analyse au biacore des interactions entre vpreb, la l, et les deux fd nous ont permis de montrer que vpreb interagit fortement avec le domaine vh des chaines , et que -like, en plus de son interaction avec le domaine ch1, contribue, de facon significative et differentielle selon les vh, a l'interaction avec le domaine vh. Ces resultats suggerent l'implication de la l dans la selection du repertoire des chaines des le stade preb. Nous avons montre que les recepteurs preb solubles ne sont pas capables d'interagir entre eux de facon homotypique, ni de se fixer a la surface des cellules preb, ce qui invalide le modele de signalisation des recepteurs preb par agregation en cis et suggere l'existence de ligands pour ce recepteur dans l'environnement medullaire. Dans ce cadre, les proteines recombinantes, l et recepteurs preb solubles, se fixent de facon specifique sur certaines lignees stromales medullaires. La caracterisation biochimique des molecules stromales reconnues par nos constructions solubles est en cours.