Abstract FR:

Chez escherichia coli le taux de replication de l'adn est determine par la frequence de l'initiation. Notre effort a ete consacre a la recherche de quelques elements cles pouvant reguler l'initiation de la replication. Nos principales conclusions sont: 1) mise en evidence d'un systeme de controle negatif de la replication. Nous avons montre qu'une fraction de la membrane externe interagit specifiquement avec l'adn hemimethylee contenant differentes regions regulatrices impliquees dans la replication, dont le site d'initiation, oric et les promoteurs des genes dnaa et mioc. L'addition de la membrane externe dans le systeme de replication in vitro inhibe l'initiation a partir du site oric. La methylase dam pourrait etre le facteur determinant de la duree de sequestration de l'oric dans la membrane. Cet enzyme peut, en effet, methyler et reactiver l'origine sequestree in vitro. L'activite de transcription des genes dnaa et mioc serait egalement inhibee par la membrane externe. Le but de la sequestration de ces differentes regions regulatrices serait d'empecher des initiations precoces ou multiples dans le cycle cellulaire. Nous avons egalement montre que la membrane externe inhibe la replication du plasmide pbr322 par interaction avec la region promotrice qui engendre l'amorce arn ii. 2. Roles des proteines dnak et dnaj dans l'initiation de la replication. L'activite de replication d'un plasmide oric est faible et thermosensible dans les extraits enzymatiques prepares a partir des mutants heat shock dnak et dnaj. La thermosensibilite de la replication peut etre supprimee par l'addition des proteines dnak ou dnaj. La faible activite de replication semble liee a une faible quantite de la proteine dnaa dans ces extraits. Nous avons montre que cette proteine initiatrice peut etre adsorbee sur une colonne d'affinite dnak-sepharose. Ces resultats suggerent que dnak et/ou dnaj seraient necessaires pour activer ou stabiliser la proteine dnaa, particulierement dans certaines conditions de stress