Abstract FR:

L'analyse de la sequence promotrice du gene de la tyrosine hydroxylase (th) de rat a permis de localiser plusieurs sites de fixation de facteurs de transcription. Une region, capable de moduler in vitro la specificite cellulaire d'expression du gene th, contient une boite e, capable de lier des facteurs de la famille bhlh, et un site octamerique (oct), cible potentielle pour les facteurs de la famille pou. Nous avons cherche a isoler les facteurs se liant sur ces sites et responsables de la restriction de l'expression du gene th. Une premiere approche de clonage de facteurs bhlh, fondee sur les homologies structurales entre les membres de cette famille, nous a conduits a l'isolement d'un facteur bhlh, relax, exprime dans des regions discretes du systeme nerveux au cours du developpement embryonnaire. La sensibilite extreme des techniques de pcr utilisees a permis l'isolement de relax dans un tissu ou son expression est marginale, relax n'etant pas exprime dans des regions catecholaminergiques. Afin d'isoler les facteurs capables de se fixer sur les sites e et oct du promoteur th, nous avons developpe une approche par systeme simple-hybride dans la levure. Ce systeme permet de selectionner in vivo les adnc codant un domaine de liaison a une sequence d'adn cible. La mise au point de cette strategie a ete delicate, et plusieurs approches successives ont finalement abouti a l'isolement de quatre clones, trois selectionnes pour leur affinite de liaison a la boite e de la th (e-a, b et g), un pour le site oct (oct-q). Deux de ces adnc, issus d'une banque de cerveau total de rat, ne correspondent a aucune proteine connue (e-g et e-b) ; le clone e-a correspond a un facteur bhlh ubiquitaire deja identifie, ritf2, ce resultat confirmant la validite du test utilise. Le clone oct-q correspond a une nouvelle proteine a doigts de zinc baptisee zf-q, dont l'expression est limitee dans le systeme nerveux.