Abstract FR:

P42 et p44 map kinases (mapk), sont des serine/threonine kinases stimulees en reponse a tous les agents mitogenes. Les mapk sont activees par phosphorylation d'une threonine et d'une tyrosine, par la map kinase kinase (mkk), elle-meme activee par la proteine kinase raf. Le module raf-mkk-mapk transmet des signaux provenant de differentes classes de recepteurs convergeant au niveau de ras. Apres activation, les mapk sont relocalisees dans le noyau ou elles phosphorylent plusieurs substrats, tels des facteurs de transcription, et participent a la modulation de l'expression des genes. Nous avons clone et exprime la mkk de hamster chinois dans des fibroblastes. Par mutagenese dirigee, nous avons identifie la serine 222 comme un site majeur d'activation. Le remplacement de ce residu par un acide aspartique, en mimant la presence du phosphate, confere une activite constitutive a la mkk. L'expression de ces mutants constitutivement actifs dans des fibroblastes reduit le besoin en facteurs de croissance et provoque la transformation des cellules, indiquant que l'activation du module mapk constitue une etape cruciale pour la proliferation cellulaire. Nos experiences preliminaires suggerent que l'etape de relocalisation de la mapk dans le noyau joue egalement un role cle dans la transmission des signaux mitogeniques. Recemment, deux autres membres de la famille mapk, nommes jnk et p38mapk, ont ete identifies. Ils sont similaires a p42/p44mapk mais interviennent dans la reponse au stress. Pour analyser comment la specificite etait maintenue entre ces modules mapk, nous avons construit des chimeres entre p38 et p44mapk. L'etude de ces molecules montre que le domaine implique dans la specificite d'activation, situe en n-terminal de la kinase, est dissocie du domaine conferant la specificite de reconnaissance des substrat, situe en c-terminal. Cette dissociation nous a permis d'obtenir une chimere decouplee qui redirige un signal de stress vers une reponse mitogenique in vivo.