Abstract FR:

Chez s cerevisiae, les deux premieres reactions de la voie de biosynthese de novo des nucleotides pyrimidiques sont catalysees par une proteine oligomerique multifonctionnelle codee par le gene ura2, et possedant les activites carbamylphosphate synthetase (cpsase) et aspartate transcarbamylase (atcase), toutes deux retroinhibees par l'utp, le produit final de cette voie de biosynthese. Chez les mammiferes, le complexe cad possede les activites cpsase, atcase, et dihydroorotase (dhoase), seule l'activite cpsase etant retroinhibee par l'utp. Ces proteines multifonctionnelles presentent le phenomene de canalisation metabolique par lequel, le carbamylphosphate synthetise au niveau du site catalytique de la cpsace, est directement transfere au site catalytique de l'atcase pour y etre utilise comme substrat. Au cours de ce travail de these, et afin d'obtenir des informations sur les mecanismes de la regulation allosterique et du phenomene de canalisation metabolique, deux approches ont ete utilisees : - l'etude du comportement de mutants de s. Cerevisiae specifiquement alteres au niveau de la sensibilite de leur atcase vis-a-vis du retroinhibiteur utp. Il nous a ete ensuite possible d'etude specifiquement le mecanisme d'action de cet effecteur sur l'activite cpsase. - l'analyse des proprietes de regulation allosterique de domaines isoles du complexe cpsase-atcase de s. Cerevisiae, et de complexes chimeriques leveure - hamster. Cette etude a notamment permis d'etablir que le domaine c-proximal de la cpsase (cps-b) permet a lui seul la synthese du carbamylphosphate.