Etude de quelques conditions necessaires a la transformation genetique du ble
Institution:
Paris 11Disciplines:
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Ce travail contribue a l'elaboration de deux methodes de transfert de genes chez le ble. I. Utilisation du pollen comme vecteur d'adn: cette methode consiste a injecter une solution contenant de l'adn plasmidique dans des fleurs de ble tendre au cours de la fecondation. Le succes de celle-ci repose sur la nature de la solution qui doit necessairement inhiber les nucleases presentes au niveau du pollen et des stigmates. Le reperage des plantes potentiellement transformees a ete effectue en recherchant l'activite des genes rapporteurs nptii, sod a et gus portes par les plasmides utilises. Au cours de trois series d'experiences, 374, 794 et 2896 caryopses ont ete obtenus dont les germinations n'ont revele, de facon indubitable, la presence du marqueur utilise. Ii transfert de genes par biolistique: nous avons demontre que le gene gus porte par deux differents plasmides s'exprimait transitoirement dans des embryons zygotiques immatures et androgenetiques de triticum aestivum. Cependant, cette expression est limitee aux tissus superficiels des embryons. Par ailleurs, l'analyse histologique de ceux-ci a revele qu'il etait quasiment impossible, par cette methode de transformation, d'atteindre les parties meristematiques du materiel utilise. L'expression transitoire a aussi ete observee dans une suspension cellulaire de triticum monococcum. De plus, l'application d'une pression de selection de 100 mg. 1##1 de kanamycine dans le milieu de culture des cellules bombardees nous a permis d'observer la regeneration de cals transformes