Abstract FR:

Rhodobacter capsulatus (r. C. ) est une bacterie photosynthetique capable de se developper en autotrophie en presence d'hydrogene et d'oxyde de carbone. L'hydrogene est active par une hydrogenase membranaire a ni-fe, codee par l'operon hupslc. Les genes hups et hupl codent respectivement pour la petite et la grande sous-unite d'une enzyme dimerique. Le gene hupc code pour une proteine presentant toutes les caracteristiques d'un cytochrome de type b. L'objectif de ce travail de recherche, a ete de poursuivre la caracterisation biochimique de l'hydrogenase de r. C. , notamment son orientation dans la membrane, sa composition en sous-unites et la nature de son accepteur physiologique. Par une mesure directe des protons liberes par l'enzyme, par la sensibilite de l'enzyme au ph externe et par l'acces direct de substrats charges au site actif, ce travail etabli solidement l'orientation periplasmique de l'hydrogenase chez r. C. . Avec l'aide d'un mutant ne possedant plus de gene hupc fonctionnel, et en utilisant une technique particuliere d'electrophorese en condition native, il a ete montre qu'un complexe ternaire existe chez la souche sauvage de r. C. . Ce complexe ternaire est pour une grande partie detruit par une extraction au triton x-100. L'inhibiteur des hemoproteines a bas potentiel, le diphenyl-iodonium, a ete teste sur l'hydrogenase. Differents types d'inhibition ont ete observes en fonction de l'etat de solubilisation de l'enzyme et, resultat majeur, le site de reduction du bleu de methylene est distinct du site de reduction du benzyl viologene. Finalement, par spectrophotometrie differentielle directe sur les membranes de r. C. , nous avons observe une reduction du pool des quinones par l'hydrogene. Cette reduction est rapide chez la souche sauvage, plus lente mais toujours presente chez la souche depourvue du cytochrome b qui ne croit pas sur h#2/co#2 l'hydrogenase sous forme dimerique (hupsl) possede donc une activite quinone reductase, peut etre physiologiquement non significative. Ce travail etabli plusieurs points d'appuis solides pour poursuivre l'etude de la topologie et des roles physiologiques de l'hydrogenase chez r. C.