Abstract FR:

Clostridum thermocellum est une bacterie cellulolytique, thermophile et anaerobie stricte, qui synthetise un complexe multienzymatique extracellulaire de haut poids moleculaire. Ce complexe, appele cellulosome et localise a la surface cellulaire, est responsable de la degradation de la cellulose et de l'adherence des cellules a ce substrat. Il est compose de sous-unites catalytiques ancrees a une proteine de charpente, de 250 kda, appelee cipa (cellulosome integrating protein). Chaque sous-unite catalytique interagit avec cipa grace a un domaine reitere de 24 residus, nomme domaine dockerine. Neuf domaines, reiteres le long de la sequence de cipa, sont complementaires des domaines dockerine des sous-unites catalytiques et sont appeles domaines cohesine. L'interaction entre les domaines dockerine des sous-unites catalytiques et les domaines cohesine de cipa est appelee interaction de type i. Outre les domaines cohesine, cipa possede un domaine de fixation a la cellulose (cbd) et un domaine dockerine c-terminal. Ce domaine n'interagit pas avec les domaines cohesine de type i. En revanche, il interagit, entre autre, avec le domaine cohesine localise a l'extremite n-terminal de la proteine sdba (scaffoldin dockerin binding), dont nous avons clone et sequence le gene. L'interaction entre le domaine dockerine de cipa et les domaines cohesine complementaires, dont la constante d'affinite est de l'ordre de 10#7 m##1, est appelee interaction de type ii. Cette interaction est dependante de la fixation cooperative, sur le complexe, de deux ions ca#2#+ avec une constante d'affinite de 4 10#6 m##2. En plus d'un domaine cohesine de type ii, sdba possede des segments slh c-terminaux, responsables de l'ancrage des proteines a la surface cellulaire. Sdba, dont la localisation a la surface cellulaire a ete determinee, est donc susceptible d'ancrer le cellulosome aux bacteries grace a son interaction avec le domaine dockerine de cipa. La derniere partie de ce travail a ete consacree a la comparaison de deux proteines de charpente chimeres (cip6 : deux domaines cohesine de type i, cip20 : un domaine cohesine de type i + un domaine cohesine de type ii) pour integrer celd et celc, munies des domaines dockerine appropries, au sein d'un complexe ternaire de structure definie.