Abstract FR:

Dans le cadre des recherches realisees en glycobiologie au centre de biophysique moleculaire a orleans, nous avons utilise des complexes adn/polylysines glycosylees pour transfecter des genes dans des cellules musculaires vasculaires lisses spontanement immortalisees derivees d'aorte de lapin (cellules rb-1) de facon selective et par une methode non virale. Dans le but d'augmenter la specificite de la transfection, nous avons montre que la transfection depend de la densite des cellules pendant la transfection, du temps de contact entre les complexes et les cellules, de la quantite de plasmide utilisee, de la nature de l'agent de passage transmembranaire et de la nature du substituant osidique de la polylysine dans le cas ou l'agent de passage transmembranaire est un peptide fusiogene. Dans le but d'augmenter la persistance du transgene dans les cellules rb-1 apres le transfert par des methodes non virales, nous avons explore deux voies. La premiere approche consiste en l'utilisation de differentes formes topologiques de l'adn. A efficacite de penetration egale dans les cellules rb-1, nous avons montre que les complexes faits avec les molecules lineaires sont respectivement 9 et 150 fois plus efficaces pour l'obtention de clones stables que ceux faits avec les concatemeres ou les molecules circulaires surenroulees. Mais, nous avons egalement montre que les complexes faits avec les molecules circulaires surenroules penetrent beaucoup plus facilement dans les cellules rb-1 que les autres. La seconde approche du probleme est d'ajouter au systeme de transfection developpe au laboratoire des activites enzymatiques utiles pour la perpetuation des acides nucleiques, et en particulier l'integrase de mo mulv, ajoutee sous forme plasmidique aux complexes. Bien qu'in vitro, l'integrase assure l'integration d'un adn matrice dans un adn cible de facon efficace et stable, in vivo, le systeme semble plus complique avec peut etre un effet toxique de l'integrase.