Abstract FR:

Une approche genetique a permis l'isolement de mutants de reponse a l'interferon (ifn) alpha/beta. Le mutant 11,1 est resistant aux ifns alpha tout en conservant une faible reponse a l'ifn beta. Il presente egalement une activite de liaison a l'ifn alpha2 fortement reduite. A l'aide de techniques d'adn recombinant et d'un systeme de contre-selection puissant des revertants, il a ete possible de cloner le gene et l'adnc humain corrigeant le phenotype des cellules mutantes. Ce gene code pour la proteine tyk2 appartenant a la sous-famille de ptk non recepteur nommee jak, possedant deux domaines catalytiques. A l'aide d'anticorps diriges contre tyk2 et par des experiences de fractionnement cellulaire, la proteine a ete localisee a la membrane ainsi que dans la fraction cytosolique. L'analyse de l'etat de phosphorylation de tyk2 a mis en evidence une augmentation rapide et transitoire du contenu en phosphotyrosines apres traitement par l'ifn alpha/beta. De plus, des etudes in vitro, ont mis en evidence la capacite de la proteine a s'autophosphoryler et a phosphoryler un substrat exogene sur des residus tyrosines. Afin d'etudier la fonction de chaque domaine de la proteine, des formes mutees de tyk2 (des deletions ou des mutations ponctuelles sur des residus tyrosines) ont ete transfectees dans les cellules mutantes 11,1. Et differents parametres biochimiques et biologiques ont ete testes. Ces resultats ont permis de mettre en evidence des domaines de la proteine tyk2 impliques aussi bien dans la liaison du ligand au recepteur que dans la transduction du signal. Ces travaux ont conduit a la proposition d'un modele sur le fonctionnement de tyk2 dans la voie de reponse aux ifns alpha/beta