Abstract FR:

Les 2-5a synthetases sont induites par l'interferon et ont la capacite de synthetiser des oligomeres d'adenosine possedant des liaisons 2'-5'(2-5a). Le 2-5a est intrinsequement capable de fixer et d'activer une rnase cellulaire, bloquant ainsi la synthese proteique par depletion en arn. Il existe 3 formes de 2-5a synthetases humaines, de poids moleculaires : 40/46, 69/71 et 100 kda. Les formes de 40 et 46 kda sont issues d'un meme gene par epissage differentiel, il en est de meme des formes 69 et 71 kda. La forme de 69 kda est composee de deux domaines homologues a la forme de 40 kda. Les etudes menees sur les formes de 69 et 100 kda nous ont permis, par l'utilisation d'anticorps monoclonaux specifiques, de mettre en evidence des differences de comportement enzymatiques. De plus nous avons demontre la capacite de ces deux formes a utiliser le gtp et non plus l'atp comme substrat donneur ou accepteur, mettant en exergue un role putatif dans le metabolisme general de la cellule. Nous avons entrepris le clonage de l'adnc codant pour la forme de 100 kda (p100) et nous avons isole un adnc codant pour cette forme humaine et nous demontrons que p100 contient trois domaines juxtaposes et homologues a la forme de 40 kda. L'approche de clonage par criblage d'expression nous a egalement permis d'isoler les adncs codant pour deux proteines vraisemblablement issues du meme gene par un phenomene de saut d'exon et apparentees aux 2-5a synthetases ; de plus, ces deux proteines, p56 et p30, sont codees par des messagers induits par les interferons de type i. La forme p56 fixe l'arn double brin et a une localisation cytoplasmique et nucleolaire. Une etude par hybridation in situ sur des chromosomes humains en utilisant des sondes correspondant aux formes p40, p69, p100 et p56 suggere la presence d'un locus 2-5a synthetases chez l'homme situe sur le bras long du chromosome 12 en position q24. 2. La caracterisation de yacs, de cosmides et de pacs correspondant a cette region la determination de l'ordre des genes 2-5a synthetases et p56. La demonstration de l'augmentation de la complexite structurale des 2-5a synthetases par multiplication d'un domaine fonctionnel, correlee a la determination d'une structure en cluster des genes codant pour ces proteines, suggere une evolution possible des 2-5a synthetases a partir d'un gene ancestral.