Abstract FR:

L'etude du metabolisme de la neurotensine dans differents tissus d'origine centrale et peripherique a permis de mettre en evidence une nouvelle activite peptidasique: l'endopeptidase 3. 4. 24. 16, appartenant a la famille des metallopeptidases. Afin de pouvoir doser l'enzyme de maniere simple et rapide, un dosage fluorimetrique a ete mis au point grace a l'utilisation d'un substrat fluorimetrique et d'un inhibiteur specifique, le dipeptide pro-ile. Ce dosage fluorimetrique de l'endopeptidase 3. 4. 24. 16 est utilise dans toutes les etudes concernant la caracterisation de la peptidase et permet de mesurer son activite dans des preparations brutes d'homogenats. Ainsi, il a ete possible d'etablir chez le rat, la distribution tissulaire, la cartographie precise de l'enzyme determinee dans 60 aires cerebrales, et le profil ontogenetique etabli dans le cerveau de souris. Le clonage de l'endopeptidase 3. 4. 24. 16 a ete entrepris a l'aide d'un antiserum polyclonal developpe contre l'enzyme cerebral, par le criblage d'une banque d'adnc de cerveau de rat. Un clone de 2448 pb a ete obtenu dont la plus longue phase de lecture ouverte code pour une proteine de 704 acides amines correspondant a un poids moleculaire de 80 kda. La proteine exprimee par des cellules eucaryotes transfectees par l'adnc est reconnue par l'anticorps polyclonal et presente les memes specificites de substrat, ainsi que la meme sensibilite a l'inhibiteur pro-ile que l'enzyme purifie. La sequence proteique deduite de l'adnc possede le site consensus des metallopeptidases a zinc: hexxh