Abstract FR:

L'initiation de la transcription des genes codant pour les proteines est une etape importante dans le controle de l'expression genetique des cellules eucaryotes. Elle necessite la presence de facteurs proteiques appeles facteurs generaux de transcription qui s'associent sequentiellement avec l'arn polymerase ii sur le promoteur. L'etude des mecanismes impliques dans cette etape passe par la surproduction de ces proteines afin d'etablir un systeme de transcription in vitro reconstitue comprenant des fractions bien definies. Dans ce but, nous avons surexprime les facteurs tfiib, tfiie et tfiif chez e. Coli a l'aide d'un systeme d'expression t7 et nous les avons purifies par des techniques de chromatographie. La substitution des facteurs endogenes par ces facteurs recombinants montre que ceux-ci sont parfaitement fonctionnels. Disposant d'un systeme de transcription in vitro constitue des facteurs recombinants tbp, tfiib, tfiie et tfiif et de fractions semi-purifiees des facteurs tfiia/stf, tfiih et arn polymerase ii, nous avons entrepris l'etude de certains des mecanismes impliques dans la transcription en nous focalisant plus particulierement sur la relation existante entre le facteur tfiih et l'activite atpase lors de l'initiation. Nous nous sommes egalement interesses a l'organisation de deux genes impliques dans la transcription. Nous avons determine la structure du gene codant pour la proteine btf3 et localise sa region promotrice dont nous avons demontre la fonctionnalite. Nous avons egalement mis en evidence une famille de genes homologues et isole trois clones comportant chacun un cadre de lecture ouvert pouvant generer des proteines tres proches de la proteine btf3. La proteine tbp joue un role primordial dans les processus de transcription. L'etude de l'organisation du gene codant pour le facteur tbp humain montre que celui-ci est localise sur un fragment genomique de 20 kb et se repartit en 8 exons